Question

【题目】下图是利用转基因技术生产干扰素的简化流程。请分析回答：

（1）过程①使用的 酶能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的 （化学键）断开。运载体的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过 __而结合。过程②需要用到 酶。

（2）A上应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动干扰素基因转录，该部位称为 。为直接检测干扰素基因是否转录，可从细胞中提取 __与用放射性同位素标记的____________作探针进行分子杂交，。

（3）利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根据这一序列合成 ，除了该物质和目的基因外，扩增仪中还需加入四种脱氧核苷酸和 酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式增长。

（4）在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是—G′GATCC—。

请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图

Answer 1

【答案】（1）（同一种）限制性核酸内切酶（限制酶）； 磷酸二酯键； 碱基互补原则 ； DNA连接酶．

（2）启动子 mRNA 目的基因

（3）引物 热稳定DNA聚合酶（Taq酶）

（4）—G′GATCC— —G GATCC— —C CTAGG— —CCTAG G—

【解析】

试题分析：（1）过程（1）是获取目的基因，需用限制性核酸内切酶把特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键分开，然后运载体的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端通过碱基互补配对原则连接，DNA连接酶连接磷酸二酯键。

（2）启动子的作用是：RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动基因转录。检测干扰素基因是否转录用分子杂交，即用放射性同位素标记的目的基因与从细胞中提取的mRNA杂交。

（3）PCR技术的条件是：一段是已知的核苷酸序列即引物、热稳定DNA聚合酶、四种脱氧核苷酸、目的基因。

（4）基因“剪刀”会切出两个粘性末端，而且互补。