Question

7．(广东高考)

(1)商品化植酸酶主要来自微生物。在产酶菌株筛选过程中，常在基本培养基中添加不溶于水的植酸钙制成固体平板，植酸钙被植酸酶分解后可在平板上产生____________，可根据其大小选择目的菌株，所得菌株需要进一步测定植酸酶活性。活性测定可以植酸钠作为底物，活性可用一定条件下单位时间的____________表示。

(2)利用上述所得菌株制备植酸酶的流程如图：

发酵液离心Ｋ菌体去除Ｋ含酶的

发酵液Ｋ透析Ｋ透析液(Ⅰ)去除Ｋ粗提物(Ⅱ)纯化Ｋ纯酶

　Ⅰ中的主要成分为____________； Ⅱ中包含植酸酶等多种蛋白质。请写出一种纯化得到植酸酶的方法及其依据。

(3)为构建基因工程菌，可用PCR等技术从上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反应包括多次循环，每次循环包括三步：____________。反应过程中打开模板DNA双链的方法是__________________________。

(4)除植酸酶外，微生物还能应用在哪些酶的生产中？(至少写两种)

Answer 1

答案：(1)透明圈　植酸钠的消耗量(减少量)或磷酸(肌醇)的生成量(产量)

(2)小分子杂质　凝胶色谱法：根据蛋白质之间的分子大小、吸附性质等差异进行纯化。(或电泳法：根据蛋白质之间的电荷、分子大小等差异进行纯化)

(3)变性、复性和延伸(长)　加热(或高温处理)

(4)蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶

解析：当植酸钙被植酸酶分解以后，会在平板上出现透明圈。植酸酶活性高低可以用单位时间内底物减少量来表示。(2)透析的目的是将酶与发酵液分开。分离不同种类的蛋白质可以用凝胶色谱法，原理是根据相对分子质量大小。(3)PCR技术包括三步：变性―→复性―→延伸，变性的原理是采用加热处理。(4)微生物产生酶的种类很多。例如蛋白酶、脂肪酶等。