Question

【题目】PCR扩增时，引物的设计和退火温度的设定是非常重要的。下列有关叙述正确的是

A. 为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的限制酶切位点

B. 设计引物时，若引物长度过短，则引物与模板链结合的特异性较差

C. 若退火温度过高，则会破坏引物与模板的碱基互补配对

D. 长度相同但GC含量高的引物需要设定的退火温度较低

Answer 1

【答案】ABC

【解析】

PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，利用的原理是DNA复制，需要条件有模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），过程包括：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。

A. 获得目的基因后一般需要将目的基因连接到质粒上，在引物上加酶切位点可以使后续的连接过程简单、可控，A正确；

B. 特异性一般通过引物长度和退火温度控制，若引物长度过短，则引物与模板链结合的特异性较差，B正确；

C. 退火的目的是让引物与DNA模板靠碱基互补配对而形成部分双链，温度过高会使形成的部分双链不稳定，即“破坏引物与模板间的碱基对”，C正确；

D. C-G间氢键比A-T之间多，在相对较高的温度下含CG数目较多时更容易成功，退火温度低会增加产物的不确定性，D错误。