Question

苯酚（C₆H₅OH）是广泛存在于化工行业废水中的一种污染物．为了分离和纯化高效分解苯酚的细菌．科研人员进行了如图1所示的相关试验．（实验中的LB培养基能使菌种成倍增加）

（1）该实验需要用到的实验仪器有：锥形瓶、培养皿、

 

（写出2种即可，但必须是微生物培养专用）．
（2）理论上，步骤②中的LB培养基含有的营养物质除了碳源外，还有

 

等（多选）．
A．氮源     B．激素      C．酶    D．生长因子    E．伊红美蓝．
（3）步骤③培养基成分中的苯酚作为细菌培养唯一的

 

；步骤③和④中的培养基最主要的成分差异是后者添加了

 

．步骤②、③、④的培养基必须经过灭菌，其具体要求是

 

．
（4）经步骤④培养后的菌落如图2，则接种时甲、乙、丙三个区域的操作顺序是

 

．多次划线后，最终可以得到由一个细胞繁殖而来的

 

．
（5）步骤④的目的是

 

；经过步骤⑤培养后，应该从残余苯酚浓度

 

的培养瓶中再分离、再培养目的菌株．

Answer 1

考点：微生物的分离和培养

专题：

分析：解答本题需掌握：（1）灭菌的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌．灼烧灭菌适合于接种工具的灭菌，一般来说是在操作过程中金属类的接种工具．干热灭菌适合于玻璃器皿、金属工具的灭菌．高压蒸汽灭菌适合于玻璃器皿、接种工具以及培养基．特别注意培养基的灭菌只能用高压蒸汽灭菌．
（2）微生物的营养物质有5类，分别是水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子．
（3）培养基的分类及用途

划分标准	培养基种类	特点	用途
物理性质	液体培养基	不加凝固剂	工业生产
	固体培养基	加凝固剂，如琼脂	微生物的分离、鉴定、活种计数、保藏菌种
化学成分	天然培养基	含化学成分不明确的天然物质	工业生产
	合成培养基	培养基成分明确（用化学成分已知的化学物质配成）	分类、鉴定
用途	选择培养基	培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物生长	培养、分离出特定的微生物（如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度的食盐）
	鉴别培养基	根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品	鉴别不同种类的微生物，如可用伊红-美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌（若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽）

（4）微生物的分离
①依据某些微生物的特殊营养需求设计培养基．例如利用以纤维素或石蜡作为唯一碳源的选择培养基，可以从混杂的微生物群体中分离出分解纤维素或石蜡油的微生物；缺乏氮源的选择培养基可用来分离固氮微生物；分离自养型的微生物在培养基中不加碳源即可，因为自养型的微生物能够利用空气中的碳源（二氧化碳）．
②在培养基中加入某种化学物质，这种化学物质没有营养作用，对所需分离的微生物无害，但可以抑制或杀死其他微生物．例如分离金黄色葡萄球菌时，在培养基中加入7.5% NaCl，金黄色葡萄球菌可耐高浓度 NaCl，经过培养以后，能够生长的可能就是金黄色葡萄球菌，再通过进一步鉴定加以确定；从土壤中分离放线菌时，可在培养基中加入10%的酚数滴，抑制细菌和真菌的生长；从细菌中分离酵母菌时，可在培养基中加入抗生素，则细菌不能生长，而酵母菌能够生长．

解答： 解：（1）微生物分离实验的过程中常用的仪器有锥形瓶、培养皿、高压灭菌锅、超净工作台、接种环（针）、涂布器等．
（2）培养基中必须添加的微生物的营养物质有5类，分别是水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子，故选AD．
（3）该实验中苯酚作为细菌培养唯一的碳源，步骤③和④中的培养基最主要的成分差异是后者添加了琼脂，培养基需用高压蒸汽灭菌，其具体要求是121℃，1.05kg/cm²，15～30分钟．
（4）利用平板划线法接种时，由图可知，划线顺序应为甲→乙→丙，最终可以得到由一个细胞繁殖而来的单个菌落．
（5）步骤④的目的是分离纯化菌种，经过步骤⑤培养后，应该从残余苯酚浓度最低的培养瓶中再分离、再培养目的菌株．
故答案为：（1）高压灭菌锅、超净工作台、接种环（针）
（2）A、D
（3）碳源    琼脂    121℃，1.05kg/cm²，15～30分钟
（4）甲→乙→丙    单个菌落
（5）分离纯化    最低

点评：微生物这部分内容是选修一的热点，在考查选修一的知识点的时候，为了增加考查的知识点的面，命题人往往将微生物、酶、植物有效成分的提取相关的知识点组合在一起进行考查，在复习一定要注意之间的联系．