摘要:16.质粒.PEP.雌激素所指物质的本质分别是 A.DNA 聚乙二醇 蛋白质 B.DNA 三碳化合物 固醇 C.DNA 聚乙二醇 固醇 D.RNA 三碳化合物 糖类

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(18分) pBR322质粒是基因工程中经常选用的工具,如图Ⅰ所示。

I.目的基因如果插入质粒的某抗性基因中,将使该基因失活。为了检查运载体是否导入原本无Ampr 和Tetr的大肠杆菌,将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养,得到如图Ⅱ的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含四环素的培养基上培养,得到如图Ⅲ的结果(空圈表示与Ⅱ对照无菌落的位置)。

(1).pBR322质粒在基因工程中的作用是            

(2).下图是pBR322质粒上被某种酶识别的一段特定序列。a处被切割后,产生的暴露出来的单链碱基序列是                                        。如果要从生物细胞中分离目的基因,首先需要进行基因定位,然后再用上述酶切割。将目的基因与质粒连接起来的酶作用于图中的        处。

(3)与图Ⅲ空圈相对应的图Ⅱ中的菌落表现型是                              ,由此说明目的基因插入了        中。

II.下面是pBR322质粒的部分碱基序列,所编码蛋白质的氨基酸序列为“甲硫氨酸—精氨酸—谷氨酸—丙氨酸—天冬氨酸—缬氨酸…”(甲硫氨酸的密码子AUG也是起始密码子)。

  

则:①、②两单链作为转录模板链的是      (填序号),该链转录产生的mRNA顺序是AUG                                                 ;如图中箭头所指碱基对G/C缺失,该基因相应片段编码的氨基酸序列为                                      

                                                                     ( 4分)。

 

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下图(一)为某基因工程中利用的质粒筒图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点,ampR为青霉素(抗生素)抗性基因,tctR为四环素(抗生素)抗性基因,P为启动因子,T为终止子,ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。下图(二)为几种酶作用于基因的位置。请回答下列问题:

(1)在基因工程中常用的工具有三种:一是用作切取目的基因的     酶;二是将目的基因与运载体拼接的      酶;三是作为运载体的质粒。
(2)将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体(质粒)进行拼接形成重组DNA,理论上讲,重组DNA可能有“         ”、“        ”、“        ”三种,其中有效的(所需要的)基因表达载体是        ,因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。
(3)利用图(一)所示的质粒拼接形成的3种拼接产物(基因表达载体)与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中,能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物(基因表达载体)是         
(4)有效的基因表达载体成功导入受体细胞进行表达时,首先需要进行转录,RNA聚合酶识别和结合的位点是图(一)中的      。在动物基因工程中,将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是             。在植物基因工程中,将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是             。是因为这种微生物很容易侵染到                
中,从而把它的Ti质粒上的             转移到受体细胞染色体的DNA上。
(5)在基因工程中,作用于图(二)所示a位置的酶是       ;作用于b位置的酶是
                

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