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限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，在质粒上有该酶的一个切点。 （1）请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
（2）质粒的化学本质是 ，可以作为哪一种基因操作工具？ 。
（3）要将用限制性内切酶Ⅰ切开的质粒与已经修饰好的目的基因连接起来，需要用到的基因操作工具是 ，该工具能将两个DNA分子末端的 和 连接起来，形成重组DNA分子的骨架。
查看习题详情和答案>>基因工程相关。2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
（1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来 ，理由是： 。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是 。
（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是 。获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是，可以避免 。
（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是： （用数字表示）。①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。
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基因工程中，外源DNA片段常用PCR方法扩增，扩增后需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。下表列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
（1）含目的基因的外源DNA片段用PCR方法扩增时使用DNA聚合酶，其不同于一般生
物体内DNA聚合酶的最主要特点是 ▲ 。PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图1为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？ ▲ 。
（2）图2中的质粒和含目的基因的外源DNA构建重组质粒，一般不只用AluⅠ一种酶切割，原因是 ▲ 。
（3）图2中获取的重组质粒时运用了 ▲ 限制酶切割，切割后的质粒与目的基因片段混合，加入了 ▲ 酶，该酶是对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？ ▲ 。
（4）重组质粒导入受体细胞后，通常要进行检测。若要检测目的基因是否转录出mRNA，可用 ▲ 技术；若要检测目的基因是否表达出蛋白质，可用 ▲ 技术。
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基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。运用基因重组进行基因敲除是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如图所示。
请回答下列问题：
（1）在把与靶基因序列同源的目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的载体与之结合，形成的DNA分子称为________，在这个过程中所需的工具酶有________和________。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞应该是________。
（3）上述途径获得的动物，其后代是否都含目的基因。为什么？________。
（4）以质粒为载体，用同一种限制性内切酶切割质粒和目的基因，在切割后的载体与目的基因连接时，连接方式有________种。
（5）上述过程实现的重组类似于减数分裂中________时期的________现象。