（12分）质粒是DNA重组技术常用载体而得到广泛使用。请回答：
（1）质粒的化学本质是                  。

（12分）质粒是DNA重组技术常用载体而得到广泛使用。请回答：

（1）质粒的化学本质是                   。

（2）质粒中的抗性基因在基因工程中被称为             ，其作用是               。

（3）若质粒的切割末端为            ，则与之连接的目的基因切割末端应为       ；可使用         把质粒和目的基因连接在一起。

（4）图1中A－D段表示质粒的某基因，阴影区的长度相当于mRNA的长度。B表示

与RNA聚合酶结合位点。请在图上方的方框内用箭头表示出RNA聚合酶在C上的移

动方向。为使目的基因直接表达，目的基因插入的最佳位点是图中的_________处。（填数字序号）

（5）与一般质粒相比，农杆菌中的Ti质粒所具有的特点是                        。

“基因靶向”技术，指的是应用DNA同源重组原理，通过一定的载体，用设计好的目的基因替代靶基因，从而达到使靶基因功能丧失的目的。借助这一技术，科学家可以用小鼠进行实验，使其体内的某项特定基因丧失功能，以帮助人们找到治疗疾病的有效方法。下面是该实验的基本过程，请回答有关问题：

(1)获得胚胎干细胞(ES细胞)。实验一般采用ES细胞作为目的基因的受体细胞，这是因为ES细胞具有发育的________。请举出一例获取ES细胞的常用方法： ____________________________________。

(2)获取目的基因。

①目的基因是靶基因的同源片段。经过修饰使靶基因的功能改变或丧失，就可获得目的基因。如果要获得活性降低了的X酶蛋白的目的基因，可以根据此蛋白的结构及功能进行X酶基因的改造，这一技术叫做________。

②为了提高实验成功率，需要通过________技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。

(3)构建基因表达载体。一个基因表达载体的组成，除了目的——基因以外，还必须有________基因，以便于细胞的筛选。质粒具有的一至多个________位点，使目的基因插人其中成为可能，因此常被选作运载体。

(4)____________________，并从中筛选，然后培育出小鼠。

①由ES细胞培育出小鼠的过程中，需要采用________技术和________技术。

②为了确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组，可通过观察小鼠的性状来检测，这属于________水平的鉴定。

9．（1 6分）“基因靶向”技术，指的是应用DNA同源重组原理，通过一定的载体，用设计 好的目的基因替代靶基因，从而达到使靶基因功能丧失的目的。借助这一技术，科学家可以用小鼠进行实验，使其体内的某种特定基因丧失功能，以帮助人们找到治疗疾病的有效方法。下面是该实验的基本过程，请回答有关问题：

    (1)获得胚胎干细胞（ES细胞）。 ES细胞是由___________中分离出来的一类细胞。

实验一般采用ES细胞作为目的基因的受体细胞，这是因为ES细胞具有发育的_________

_______________________________________________________________________。

    (2)获取目的基因：

    ①目的基因是靶基因的同源片段。经过修饰使靶基因的功能改变或丧失，就可获得目的基因。如果要获得活性降低了的X酶蛋白的目的基因，可以根据此蛋白的结构及功能进行X酶基因的改造，：这一技术叫做__________________工程。

    ②为了提高实验成功率，需要通过PCR技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝．PCR技术需要的材料与条件有___________________________________。

    (3)构建基因表达载体。一个基因表达载体的组成，除了目的基因以外，还必须有__________基因，以便于细胞的筛选。质粒具有的一个或多个限制酶的切割位点，使目的基因插入其中成为可能，因此常被选作运载体。

(4．)将基因表达载体（目的基因）____________，并从中筛选，然后培育出小鼠。

   ①由ES细胞培育出小鼠的过程中，需要采用____________________________技术。

   ②为了确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组，可通过观察小鼠的性状来检测，这属于_________________________水平的鉴定。