Question

(2006江苏高考，40 )基因工程又叫基因拼接技术。?

（1）在该技术中，用人工合成方法获得目的基因的途径之一是：以目的基因转录的　　 为模板，　　　 成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成。?

（2）基因工程中常用的受体细胞有细菌、真菌、　　 。若将真核基因在原核细胞中表达，对该目的基因的基本要求是　　　 。?

（3）假设以大肠杆菌质粒作为运载体，并以同一种限制性内切酶切割运载体与目的基因，将切割后的运载体与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶。连接产物至少有　 种环状DNA分子，它们分别是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

 

Answer 1

（1）mRNA　逆转录　双链DNA（目的基因）　（2）动植物细胞　除去内含子　（3）3　运载体自连的、目的基因片段自连的、运载体与目的基因片段相连的环状DNA分子

 

基因拼接技术一般要经过四个步骤：一是获取目的基因，二是目的基因与运载体结合，三是将目的基因导入受体细胞，四是目的基因的检测与表达。目的基因的获取主要有两种途径，一是从供体细胞的DNA中直接分离基因，二是人工合成基因。由于真核生物基因中有不表达的核苷酸序列（内含子），所以要想真核生物的基因在原核细胞中表达，就必须除去目的基因中的内含子。人工合成目的基因有两种方法：一是通过mRNA→单链DNA→双链DNA；二是根据蛋白质氨基酸序列→mRNA序列→推测出结构基因核苷酸序列→通过化学方法人工合成。常用的受体细胞有细菌、真菌和动植物细胞。常用的运载体有细菌的质粒、噬菌体和动植物病毒。当把切割后的运载体与目的基因放在一起，并加入DNA连接酶，将会出现3种环状的DNA分子。?