Question

请回答下列关于PCR的问题。

(1)如果只需要大量克隆模板DNA中间的某一个特定区段，应加入________种特定的引物，当温度降低时，引物与两条“舒展”的模板的特定位置结合，在DNA聚合酶的作用下，只能在引物的________端连接脱氧核苷酸，两条子链的延伸方向都是________________；而细胞内的复制是边________边________，在解旋部位，一条从________到________方向的互补新链是沿着解旋方向向前合成的，但另一条从________到________方向的互补新链则先按照________方向一段一段合成DNA单链小片段(“冈崎片段”1000～2000个核苷酸长)，这些片段再由DNA连接酶连接起来，可见这条链是________________着合成的。

(2)通过PCR技术使DNA分子大量复制，若将一个用¹⁵N标记的DNA分子放入试管中，以¹⁴N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制四次之后，¹⁵N标记的DNA分子占全部DNA分子总数的比例为__________。

 

Answer 1

：(1)两　3′　从5′端向3′端　解旋　复制　5′端　3′端　3′端　5′端　从5′端向3′端　倒退　(2)1/8

 

PCR的特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物，实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段，两引物间距离决定扩增片段的长度，因为DNA聚合酶只能从两引物的3′端开始连接脱氧核苷酸，两引物的3′端决定扩增产物的两个5′端位置。由此可见，引物是决定PCR扩增片段长度、位置和结果的关键，引物设计也就更为重要。细胞内的DNA复制的环境是相对恒定的，DNA的复制是边解旋边复制的，右图所示为细胞内DNA在向右解旋时两条子链的延伸方向。