题目内容
【题目】下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，左图、右图中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：
限制酶 | BamH Ⅰ | BcIⅠ | Sau3AⅠ | HindⅢ |
识别序列及切割位点 | G GATCC CCTAG G | T GATCA ACTAG T | GATC CTAG | A AGCTT TTCGA A |
（1）根据表中的酶切位点，Sau3A I在质粒上有________个酶切位点。用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用__________________两种限制酶切割。
（2）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，对于该部位，________________。
A.BamH I酶和Bcl I酶都能切开 B.BamH I酶和Bcl I酶都不能切开
C.BamH I酶能切开，Bcl I酶不能切 D.BamH I酶不能切开，Bcl I酶能切开
（3）酶切后的载体和目的基因片段，通过_________酶作用后获得重组质粒。为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加_____________，平板上长出的菌落。
（4）在一个典型的基因内部，转录起始位点（TSS）、转录终止位点（TTS）、起始密码子编码序列（ATG）、终止密码子编码序列（TGA）的排列顺序是____________。
A.ATG—TGA—TSS—TTS B.TSS—ATG—TGA—TTS
C.ATG—TSS—TTS—TGA D.TSS—TTS—ATG—TGA
【答案】3 BclI和HindⅢ B DNA连接酶 四环素 B
【解析】
分析题图：左图质粒上，四环素抗性基因有BamH Ⅰ酶切割位点，氨苄青霉素抗性基因上有BcIⅠ酶、BamH Ⅰ酶、HindⅢ酶切割位点；目的基因两端有BamH 、BcIⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ酶的切割位点。分析表格，BamH 、BcIⅠ、Sau3AⅠ三种酶切割的粘性末端相同。
（1）根据表格分析可知，Sau3A I在质粒上有3个酶切位点。选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamH在质粒上有两个切割位点，会使质粒中的启动子丢失，因此只能选BcIⅠ和HindⅢ酶。
（2）BamH I酶和Bcl I酶切割产生的粘性末端相同，但两种酶识别的序列不同，所以若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接后，形成的DNA序列两种酶都不能识别。
（3）酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后获得重组质粒。由于重组质粒中氨苄青霉素抗性基因被破坏，所以为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素。
（4）已知基因的结构包括编码区和非编码区，在编码区的上游有启动子，其上含有转录起始位点（TSS）、在编码区先有起始密码子编码序列（ATG），最后有终止密码子编码序列（TGA）、在非编码区的下游有终止子，其上含有转录终止位点（TTS），所以在一个典型的基因内部，以上四种序列的排列顺序是TSS-ATG-TGA-TTS。
