题目内容
【题目】（题文）“基因剪刀手”杨璐菡扫除了猪器官用于人体移植的最大障碍，其研究成果使得美国《科学》杂志打破惯例提前发表科研成果，该技术将为全球上百万病人带来希望。从2014年起，杨璐菡作为异种器官移植课题 带头人，带领10个人的科研团队利用新发明的“基因剪刀”技术，敲除猪基因组中可能的致病基因。“基因敲除”技术的主要过程示意图如下：
请根据题述内容回答下列问题：
（1）“基因敲除”技术的原理是_________，将neoR基因插入到靶基因过程中使用的工具酶是___________和___________。
（2）将突变基因DNA导入胚胎干细胞之前要___________，该操作的目的是___________，该步骤中常用不同的限制酶进行切割，这样做的优点在于可以防止______________________。
（3）要获得一只含失活靶基因的小鼠，则选择的受体细胞应是 ___________，图中的neoR基因的作用是______________________。
（4）用于器官移植的猪最终需要完成基因改造及PERV（猪内源性逆转录病毒）的删除等工作，改造过的猪胚胎可植入母猪体内，胚胎在母猪体内存活的原因是_____________________。
【答案】基因重组限制酶DNA连接酶构建基因表达载体使目的基因在受体细胞中稳定存在并发挥作用质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化受精卵获得失活的靶基因受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应
【解析】
考查基因工程的基本操作及利用已有知识解决实际问题能力
（1）由图可知，“基因敲除”技术的实质就是使靶基因失活，方法是通过在靶基因和neoR基因的拼接，所以原理是基因重组，基因拼接技术使用的工具酶是限制酶和DNA连接酶
（2）依据基因工程的操作程序，将突变基因DNA导入胚胎干细胞之前要进行基因表达载体的构建，从而有利于目的基因在受体细胞中稳定存在并发挥作用。用同一种限制酶剪切DNA片段，片段两端黏性末端相同，这样会导致被剪切片段自身环化
（3）培育转基因动物，由于体细胞体外培养不能发育成个体，受体细胞一般用受精卵， neoR基因的作用是使靶细胞失活
4）胚胎工程中外来胚胎可以在受体子宫存活的基础是子宫不对外来胚胎产生免疫排斥反应，这也是改造过的猪胚胎可植入母猪体内存活的原因
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