Question

【题目】幽门螺杆菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化道溃疡的主要致病因素，其不良预后是胃癌。据研究发现，目前我国有超过50%人感染了Hp病菌。Hp是微需氧菌，环境氧要求5%～8%，在大气或绝对厌氧环境下均能生长，Hp的尿素酶极为丰富，尿素酶催化尿素水解形成“氨云”保护细菌在高酸环境下生存。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：配制培养基→灭菌、倒平板→X→培养→观察。请回答：

（1）在配制培养基时，要加入尿素和________________指示剂，这是因为Hp能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现红色环带。

（2）步骤X的操作如图所示：

①图中所用微生物接种的方法是__________________________。

②图示每次取样前需用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，目的是_______________。

③下列关于此实验的操作，正确的是____________。

A．高压蒸汽灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B．含酚红指示剂的尿素为唯一氮源的培养基灭菌后，冷却至室温倒平板

C．取103、104、105倍的稀释液和无菌水各0．1mL，分别涂布于各组平板上

D．在皿盖上用记号笔做标记

（3）在培养时，需将培养皿_____并放在恒温培养箱中，否则将可能导致无法形成单一菌落。

（4）临床上14C呼气试验检测是一种安全、准确的检测Hp的方法，其基本原理是当被检测者服用含有_________________的胶囊后，如患者的胃内存在Hp感染，则可将其分解为氨和14CO2。

（5）某同学将分离得到的Hp扩大培养，对其进行计数。取1 mL菌液稀释106倍后再各取0．1 mL分别涂布在3个培养基上，培养一段时间后，其菌落数分别为180、220、200个，则每升菌液中Hp的数量_________个，此方法测定的活菌数比实际活菌数少的原因为________________。

Answer 1

【答案】酚红指示剂 稀释涂布平板法 使微生物和无菌水混合均匀 C 倒置 14C标记尿素 2×1012 当两个或多个细胞连在一起时，平板上只能观察到一个菌落

【解析】

微生物的研究通常包含微生物的获得、分离纯化、培养以及保存等。单菌落分离法包含划线分离法和涂布分离法，常用于分离获得单菌落。通常是细菌在固体培养基上（内）生长发育，形成以母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞的集团，称之为菌落。

（1）由于Hp含有尿素酶，尿素酶能将尿素分解成氨，而氨会使培养基碱性增强，即pH升高，导致酚红指示剂变红。

（2）①微生物接种的方法很多，但都要注意防止杂菌的污染；接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，图示所示为稀释涂布平板法。

②图示每次取样前需用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，目的是使微生物和无菌水混合均匀。

③A、高压蒸汽灭菌加热结束时，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，A错误；

B、含酚红指示剂的尿素为唯一氮源的培养基灭菌后，冷却至50℃左右倒平板，不需要冷却到室温，B错误；

C、取103、104、105倍的稀释液和无菌水各0．1mL，分别涂布于各组平板上，C正确；

D、用记号笔标记培养皿中的菌落时，应标记在皿底上，D错误。

故选C。

（3）在培养时，需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，倒置培养基的目的也是为了获得单一菌落。

（4）如果人感染了Hp，能将尿素分解为NH3和CO2，因而用14C标记尿素中的C，可通过呼吸产物来判断是否感染Hp。

（5）1 L菌液中Hp的数量=（180+220+200）÷3÷0．1×106×103=2×1012（个）；用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低的原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。