Question

红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的。我们可以选用猪、牛、羊等动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：

（1）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。

①其中加入柠檬酸钠的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

②此过程即是样品处理，它应包括红细胞洗涤、　　　　　　　　 、分离血红蛋白溶液。

③洗涤红细胞的目的是　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（2）收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析，这就是样品的粗分离。

①透析的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　 。

②透析的原理是　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（3）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS?聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。其中通过凝胶色谱法将样品纯化的目的是　　　　　　　　　　　　　 　　　。

 

Answer 1

（1）①防止血液凝固 ②血红蛋白的释放 ③去除杂蛋白 （2）①去除相对分子质量较小的杂质 ②透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内

（3）通过凝胶色谱法去除相对分子质量较大的杂质

 

（1）柠檬酸钠是一种抗凝剂，加入柠檬酸钠可以防止血液凝固；样品处理包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液；洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。（2）透析袋一般是用硝酸纤维素制成的，透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内，透析可以去除样品中分子量较小的杂质或用于更换样品的缓冲液。（3）凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法，因此，通过用凝胶色谱法去除相对分子质量较大的杂质。